Spørgsmål nr. 12 vedrørende forslag til lov om ændring af lov om

dyreforsøg og lov om kloning og genmodificering af dyr mv. (Gen-

nemførelse af nyt dyreforsøgsdirektiv mv.) (L 138):

”Ministeren bedes redegøre for hvordan de 5 mio. kr. der erafsat på finansloven, er anvendt konkret og hvad udkommethar været i relation til alternative testmetoder.”

Svar:

Justitsministeriet har til brug for besvarelsen af spørgsmålet indhentet enudtalelse fra Ministeriet for Videnskab, Teknologi og Udvikling, som haroplyst følgende:”Det Strategiske Forskningsråd, Programkomiteen for indi-vid, sygdom og samfund, udmøntede i 2008 5 mio. kr. tilfølgende tre projekter under temaet ”Alternativer til dyre-forsøg i forskning”.

Peter Møller, Lektor, Københavns Universitet. 1,4 mio.

kr.

In vitro oxidative stress and response methods as alternativeto animal experimental modles for the detection of hazard-ous effects of nanoparticles.

Jann Hau, Professor, Københavns Universitet. 1,8 mio.

kr.

Refinement of pain treatment in laboratory mice after inva-sive procedures.

Jens Zimmer Rasmussen, Professor, Syddansk Universi-

tet. 1,8 mio. kr.

Use of human stem cells and rodent brain slice cultures asalternatives to experimental animal research, exemplified byscreening for developmental neurotoxicity.Ingen af projekterne er endnu helt afsluttede. Forsknings- ogInnovationsstyrelsen har bedt forskerne om at beskrive del-resultaterne, herunder formålet med projekterne. Beskrivel-serne findes nedenfor:

Delresultater, beskrivelse fra Peter Møller

Projektets første fase har sigtet mod at udvikle testsystemertil at undersøge nanopartiklers skadelige effekter i lungerneog blodårerne med blandt andet lungekræft og åreforkalkningsom konsekvens. I de fleste testsystemer anvendes én type afceller, mens man i kroppen har mange forskellige celler, derpåvirker hinanden. Vores udgangspunkt i udviklingen af test-2

systemer som alternativer til dyreforsøg har været at under-søge, om nanopartikler forårsager større skadelig effekt i cel-ler, hvis der er flere forskellige typer af celler i testsystemer-ne.Vi har etableret et testsystem, hvor blodceller kan aktiverestil at binde til enten lungeceller eller blodkarceller. Testsy-stemerne retter sig specielt mod at undersøge, om partiklerneøger dannelsen af reaktive ilt-molekyler (også kaldet ”frie ra-dikaler”), forårsager skade på arvematerialet eller aktivererblodkarcellerne. Vi har overvejende undersøgt de skadeligeeffekter af diesel-udstødningspartikler, fordi vi har undersøgteffekten af disse partikler i dyreforsøg. Det er herved muligtat se, om de samme skadelige effekter opstår både i cellekul-turer og i dyr.I det foreløbige resultat af testsystemet for lungeceller kan vise, at partiklerne forårsager dannelse af reaktive ilt-molekylerog skader på arvematerialet i både lungeceller og blodceller.Derimod synes der ikke at være nogen gevinst ved at haveflere cellekulturer i samme testsystem. Den umiddelbarekonklusion for dette testsystem er således, at de skadelige ef-fekter, som partiklerne forårsager, foregår inde i cellerne ogikke ved, at cellerne påvirker hinanden. Det skal dog under-streges, at vores undersøgelser ikke endnu er fuldt afsluttet,og konklusionen skal tages som et forsigtigt skøn.I testsystemet for blodkarceller kan vi se, at udsættelse fornogle typer af partikler bevirker, at blodceller binder til blod-karcellerne, mens andre typer af partikler ikke forårsagerdenne binding. I dette testsystem ser det således ud til, at derforegår en direkte partikel-induceret påvirkning af cellerne,der bevirker, at blodcellerne binder til blodkarcellerne.Hovedresultatet af undersøgelsen er, at vi har udviklet testsy-stemer baseret på cellekulturer, der kan anvendes til scree-ning af nanopartiklers farlige egenskaber. Vi vurderer, attestmetoderne er anvendelige til, at vi kan bruge dem i scree-ning af nanopartiklers farlighed. De er således også lovendekandidater i forbindelse med udvikling af testmetoder som al-ternativ til dyreforsøg.

Delresultater, beskrivelse fra Jann Hau:

Dette Refinement-projekt skal muliggøre effektiv smertebe-handling af mus efter invasive operative procedurer gennemdyrenes selvadministrering af smertelindrende midler.Vi har udviklet et pålideligt non-invasivt mål for smer-te/stress gennem måling af stresshormoner (corticosteroider) ifæces i en række dyrearter kombineret med adfærdsanalyser.Ved at lade rotter selv administrere smertebehandling gen-3

nem frivillig indtagelse af Nutella iblandet smertelindrendemiddel (buprenorphin, har vi implementeret, at forsøgsrotterudsat for invasive indgreb rutinemæssigt smertebehandles påKøbenhavns Universitet i Afdelingen for Eksperimentel Me-dicins forsøgsafsnit Panum 10.3.Mus er talmæssigt det mest populære forsøgsdyr, og med an-vendelse af automatiseret blodprøvetagningsudstyr arbejdervi for nærværende med at fastlægge, hvor megen stress kræ-ves (intensitet og varighed af forhøjet niveau af stresshormoni blodet) for at denne efterfølgende (8-14 timer) kan måles ifæces. Denne viden kombineres med analyser af smertelin-drende midlers (buprenorphin og melaxicam) effektivitet ef-ter oral indgift (sondning eller frivillig indtagelse af Nutellamed smertelindrende middel iblandet) i de mest brugte muse-stammer efter rutineindgreb (vasectomi). Studier af normaladfærd og adfærdsparametre kendetegnende for smerte/stressindgår. På basis af de opnåede resultater udvikles et ’beha-vioural management system’, hvori indgår selvadministreringaf smertelindrende lægemiddel gennem opblanding af nød-vendige mængder i Nutella. Systemet vil blive brugt til ud-vikling af et program for rutinesmertebehandlig af mus, somplanlægges implementeret overalt i universitetets eksperi-mentelle afsnit. Der er en PhD-student tilknyttet projektet, ogdette er langt fremskredet. Der er således flere manuskripterpå forskellige stadier af offentliggørelse.

Delresultat, beskrivelse fra Jens Zimmer Rasmussen

Formålet med dette projekt er at udvikle metoder til cellekul-tur-baseret screening for stoffer, der forhindrer eller skaderden normale udvikling af nervesystemet hos fostre og børn.Projektet har som udgangspunkt forskningen i udvikling afnerveceller og gliaceller fra embryonale stamceller og stam-celler fra den umodne hjerne.Resultater med humane embryonale stamceller:I projektet,som ikke er afsluttet, har vi testet og udvalgt én bestemt hu-man embryonal cellelinie KMEB2, som har en naturlig di-sposition til at udvikles i neural retning. Med etableret proto-kol er der som overgang til andet trin testet for reproducerbartudbytte af celler med markører for umodne og modne nerve-og gliaceller, men der er stadig en ret stor variation mellemserierne. De første tilsætninger af metylkviksølvklorid medtest af dosis-responseffekt er udført med rimelige præliminæ-re resultater.Resultater med neurale stamceller:Som udgangspunkt er deranvendt humane neurale stamceller med oprindelse i den fø-tale forhjerne i form af en cellelinie HNS1, som er tilgænge-lig fra spansk samarbejdspartner. Protokoller for spontan oginduceret udvikling til celler, der udtrykker markører for ner-4

veceller og to former for gliaceller (astroglia og oligo-dendroglia) er etableret med acceptabel reproducerbarhed.Sæt af tidlige, senere og endelige nerve- og gliacellemarkørerer indkørt, men afventer praktisk igangsættelse.Mislykkede forsøg på bestemmelse af antal og celletyper medflowcytometri:Flowcytometri kan i mange tilfælde anvendestil bestemmelse af antal celler af forskellig type i f. eks. cel-lekulturer. Forudsætningen er, at cellerne specifikt kan identi-ficeres af apparatet, som sorterer og tæller dem baseret på na-turlig lysbrydning, størrelse eller udtryk af specielle markø-rer, som farves med flourescerende stoffer. Efter mange for-søg og korrespondance med andre laboratorier har vi, somandre måttet konstatere, at metoden ikke er optimal og umid-delbart brugbar til neurale stamceller, hvorfor den er opgivet.Konklusion:Konceptet for projektet har vist sig at holde,hvilket betyder, at der er mulighed for, at man vil kunne er-statte dyreforsøg med test på cellekultur-niveau. Den prakti-ske udførelse har udover gode præliminære resultater inden-for det første trin været præget af uforudsete praktiske hin-dringer i projektets gennemførelse, med udgangspunkt i loka-le bemandingsforhold.”